工程院食品安全院士团队

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生产过程环境微生物污染水平的控制对食品药品成品质量的影响至关重要，因此，我们必须对生产过程进行风险评估和分析，对关键控制点进行微生物检测监控，以确保产品在生产过程中不被污染，保证成品质量。

根据《GMP药品生产质量管理规范》、《GB 14881-2013 食品安全国家标准 食品生产通用卫生规范》等相关标准，生产过程环境微生物的主要监控指标有空气沉降菌、空气浮游菌及表面微生物。

1.空气沉降菌

通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。沉降菌的采样属于被动式采样，反映最终落在地面或物体表面的灰尘中携带的微生物。

检测标准：

GB/T 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物

GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

检测方法：

常用的检验方法是沉降平板法，即测定在一定时间内从空气中降落到单位面积地面上的微生物个数。操作步骤：将融化的营养琼脂培养基或大豆酪蛋白琼脂培养基（霉菌监测用沙氏培养基）倒入90mm无菌培养皿中制成平板（或购买商品化沉降皿），按标准要求布设在监测点上（监测点按标准选择和布局），打开皿盖暴露在监测环境中5～30min（动态监测不大于4小时），让空气中的微生物降落在平板表面，盖好皿盖，然后倒置放入培养箱中，培养48h后计菌落数（SDA培养5天）。

环凯牌三层无菌包装沉降皿

2.空气浮游菌

用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。浮游菌的采样属主动采样，反映洁净区内空气中生物粒子的浓度。

检测标准：

《GB/T16293-2010 医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》

检测方法：

常用撞击式浮游微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物（浮游菌）采集到专门的平板培养基上，经实验室培养后得到进行菌落计数。

操作步骤：将浮游微生物采样器放置在监测点上，卸下多孔采样头和保护盖，用75%酒精对多孔采样头和保护盖、培养皿座及外表进行擦拭消毒，然后将预先制作好装有TSA或SDA培养基的培养皿（或购买商品化平板）放置于培养皿座上，并将培养皿调整至水平，装好多孔采样头，设定采样参数，开机进行采样。采样结束后，打开多孔采样头，取出培养皿，盖回原培养皿盖，贴上标签或写上编号，置于已到达设定温度的恒温培养箱内，进行倒置培养。

环凯牌浮游微生物采样器

3.表面微生物

表面微生物，指在生产过程中，各物体表面存在的微生物，通过与产品直接或间接接触而转移到产品中，从而影响了产品的安全性和有效性。接触面分直接接触面和间接接触面，直接接触的表面有：车间内的空气、加工设备、工器具、操作台案、转送带、储水池、内包装物料、加工人员的手或者手套和工作服等等； 间接接触的表面有：未经清洗消毒的冷库、车间的门把手、操作设备的按钮、车间内的开关、墙壁等。

检测标准：

2015版中国药典

GB 15979-2002 一次性使用卫生用品卫生标准

GB 14934-2016 食品安全国家标准 消毒餐（饮）具

GB 15982-2012 医院消毒卫生标准

检测方法：

常用的表面微生物检测方法有：表面冲洗法；棉签擦拭法；接触平皿法。

棉签擦拭法：检测物体表面的取样面积一般为25cm2，人体表面擦拭至少应包括双手手指印、头、口罩、肩部、前臂、手腕和腿等。棉签擦拭法特别适用于不规则表面，取样时，手握住拭子柄，以30°角与取样表面接触，采用S型或Z型缓慢并旋转棉签充分擦拭。

环凯牌表面微生物采集拭子

接触平皿法：接触平皿法是将接触皿直接接触需采样的物体表面，接触时间一般在10s左右，培养后便会长出菌落。因为该方法容易操作而且可以定量，所以，被广泛使用。但是，这个测试只适用于平整光滑的表面。取样后，需用蘸有质量分数为75%的乙醇的纱布擦拭被取样表面，以除去残留。将取样后并做好标记的接触碟置于培养箱中培养，培养箱的参数一般设定在30～35℃，培养72h后计数。

环凯牌三层无菌包装接触皿