实验室微生物检测过程注意事项
发布时间：2019-11-29 浏览次数：438
一、培养基的灭菌及使用
（1）每次进行培养基配置时，要注意其生产日期是否在保质期内，查看其开瓶日期及瓶口密封性，保证其未变质，并且未吸潮。
（2）培养基配置时，称量要准确，包括盐水的分装要准确。
（3）一定要保证现配制现灭菌，未灭菌的配好培养基不能长时间放置，更不可隔夜。
（4）培养基灭菌时要保证恒温、恒压，同时要保证有效灭菌时间。
（5）灭菌过的培养基要冰箱保存，可保存一周，一般不超过 3 天。而且要遵循“先入先出”原则，先配制的培养基要先使用。
（6）在使用时，要根据当班次的使用量，用水浴锅先将培养基溶化为液态，然后及时调低水域温度（先化好的可从水域取出，放在水浴锅锅盖上）待用，千万不可长时间使培养基处于高温状态。
（7）做产品微生物检测时，倾倒培养基温度在 45℃左右，不可过烫，避免将菌烫死；也不可过凉，化好的培养基又结块凝固，不便于观察结果。
（8）每瓶培养基均要做空白。
（9）尽量集中做样，避免频繁打开同一瓶培养基瓶塞，增大培养基的污染几率，出现误差结果。
（10）培养基剩余过少时，可先将其倾倒成空白用板。
二、 做样环境的维持
（1）大环境（房间）
1）微生物检测做样时，窗户和空调要关闭，或用酒精对房间进行喷雾消毒，避免房间内空气流通影响安全柜内部环境（最好在有通排风系统的恒温恒湿无菌间进行操作）。
2）如果在原来的原料微生物检测室进行做样，要定期开启紫外灯，对房间进行杀菌。
（2）小环境（生物安全柜）
1）工作前准备
a. 首先微生物检测实验室生物安全柜打开紫外灯照射30分钟
b. 关紫外灯，打开生物安全安全柜的日光灯和风机，用消毒剂对生物安全柜的内表面进行消毒擦拭
c. 将实验中需要用到的物品集中用消毒剂擦拭后放在台面相应位置上（切记勿阻挡风口！）
d. 等待5min，净化工作区的空气污染物
2）操作规范
a. 微生物检测实验过程中，双臂垂直缓慢进入前面的开口，在生物安全柜中等待大约一分钟，以使安全柜调整完毕后才可对物品进行处理。
b. 所有操作应在离前窗10cm以外的工作区进行。
c. 废弃物应丢弃在生物安全柜内的处理容器中。
3）微生物检测实验操作时注意事项
a. 双避免胳膊在前开口处快速移动和频繁进出
b. 尽量避免污染的物品进入洁净区
c. 避免使用明火干扰气流，可使用微型电加热器，最好使用一次性接种环。
d. 在生物安全柜内进行操作时，不能进行文字工作
e. 尽量减少操作者身后的人员活动。
4）工作结束后的要求
a. 将生物安全柜继续运行至少3min来完成“净化”过程
b. 将柜内物品移出前，应使用有效的消毒剂擦拭（特别是霉菌）
c. 每天实验结束后，对生物安全柜的内壁和台面进行擦拭
d. 等待5分钟后，关闭前窗，关灯，关风机，紫外灯照射30分钟
三、 工器具的洁净度
（1）玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌。
（2）做样用剪刀、勺子等物品要做到做样专用，不可与其它操作器具混用，使用时，先用75%酒精消毒，再采用灼烧方式进行灭菌。
（3）接种针（环）采用灼烧方式进行灭菌，但要注意做样时要先将接种针（环）进行冷却。
四、样品的采集及微生物检测
（1）保证采样器具的无菌性
1）玻璃器皿：采用干热灭菌方式进行灭菌，保证恒温、时间足够（但不可时间过长，导致玻璃器皿易裂纹而报废）。
2）取样筐：使用前要用75%酒精进行喷洒消毒。
3）取样勺：要保证其清洁消毒，清洁后用75%酒精进行擦拭消毒。
4）取样袋：可先用酒精进行擦拭消毒，再在安全柜用紫外灯照射消毒，（包装车间要在传递窗用紫外灯照射消毒）。
5）电子称表面用 75%酒精消毒。
（2）人员操作
1）保证手部的清洗、消毒：取样前及做样前都要先洗手再消毒。
2）取样要具有代表性（随机样、目的样、综合样）且要标示清楚。
3）取样完毕，不可在车间逗留，要及时将样品放入安全柜，对其外表面进行紫外灯照射消毒。
4）在要求的做样区域进行操作。
5）做样前，要用 75%酒精棉球对样品袋口部进行擦拭消毒，再开口。
6）往盐水瓶加样品时，要注意勺子或袋子尽量不接触瓶口。
7）样品计量要准确，稀释倍数也要准确（1mL 吸管不允许将管口敲掉），进行 100 倍稀释时，1mL 吸管要伸入盐水中，不可以将样品从管壁流下去，同时要避免将管底部捅破。
8）盐水温度以 40℃左右为宜，不能过热，会将部分微生物烫死；也不能温度太低，不能将样品溶解完全。
9）进行稀释时，要摇匀，保证溶液的均一性。
10）倾倒平皿时，要注意培养基瓶口不要接触到平皿；倾倒的培养基要适量，不可以太少，在培养过程中干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右为宜。
11）做大肠菌群样时，要提前将乳糖胆盐培养基培养管按需要量备好，放入安全柜对外表面进行紫外线灭菌。
12）接二步时，要注意先将接种针（环）进行冷却，避免出现接不上菌落的情况发生，导致无法判断、确认。
13）做样完毕，及时放入相应培养箱进行培养，并清理清洁安全柜。
五、 微生物的培养
（1）在培养过程中，要随时监控培养箱温度，保证其在适宜的温度进行培养。
（2）要按照《微生物检验规范》要求及时观察结果，出现异常，要及时分析原因进行反馈。
